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基因敲降項目的一般工作思路：1）首先分析目標基因在斑馬魚胚胎發(fā)育早期是否有表達（如果沒有表達，則根本不存在敲降問題）。2）設計并安排實驗（RT-PCR）檢測目標基因在胚胎發(fā)育早期的表達情況（目的在于確認目標基因在胚胎發(fā)育早期有表達，同時在有表達的情況下建立檢測目標基因表達下調的檢測方法）。實際上，即使數(shù)據(jù)庫中有描述該基因在胚胎發(fā)育早期有表達，也要開展此項實驗。3）在確認該基因在胚胎發(fā)育早期有表達的

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斑馬魚敲降CRISPRi法與MO（嗎啡啉）法比較

一、基因敲降的前期準備工作相同1.1?生物信息學分析目標基因在斑馬魚早期胚胎發(fā)送過程中是否有表達。1.2?收集斑馬魚早期發(fā)育胚胎（通常為48?hpf?前的胚胎），提取總RNA，然后進行體外轉錄（RT）。1.3?設計檢測目標基因表達的PCR?引物，以1.2獲得的cDNA?為模板，進行PCR?擴增，確認目標基因在早期有表達。二、MO法與CRISPRi法的敲降原理不同2.1?MO?是在轉錄后水平上敲降基

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